脾功能亢进，是指脾脏肿大后，对血细胞产生破坏和隔离作用，使血液中三系细胞减少，其中贫血程度与脾肿大呈正相关，即脾肿大、脾功能亢进越明显，则贫血越严重。脾功能亢进，主要由肝硬化门静脉高压、脾脏血液回流受阻所引起，具有肝功能减退、门静脉高压、全血细胞降低等症状和体征。肝脾B超、CT、磁共振检查及胃镜、腹腔镜检查和食管X线检查等，具有诊断意义，以下化验检查有助于本症的鉴别诊断:
(1)外周血检查:日本血吸虫病晚期肝硬化、肝豆状核变性肝硬化、酒精性肝硬化、各种病毒性肝炎肝硬化等脾功能亢进时，全血红细胞、白细胞、血小板三系细胞均有不同程度的降低。
(2)尿、粪便检查:肝炎肝硬化脾功能亢进时，黄疸者，尿中胆红素(BIL)增高；无黄疸者，如尿胆原(URO)增加，常提示肝功能不良。肝豆状核变性肝硬化脾功能亢进时，尿铜(Cu)增加，如青霉胺负荷试验阳性，有诊断意义。日本血吸虫病肝硬化脾功能亢进时，粪便直接涂片或沉淀集卵检查，均可找到虫卵；沉淀孵化法检查，可找到毛蚴，可确定诊断。
(3)肝功能检查:酒精性肝硬化脾功能亢进时，丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)均可升高，其中AST升高比ALT升高明显，AST/ALT大于2；血清胆红素(BIL)，也可升高。肝豆状核变性肝硬化脾功能亢进时，ALT、AST均升高，麝香草酚浊度试验(TTT)等值也可升高。各种病毒性肝炎肝硬化失代偿期时，ALT、AST值均升高，以ALT升高极为明显；而总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)，可同时升高。
(4)血清蛋白及蛋白电泳测定:各种肝硬化失代偿能力时，白蛋白(A)合成减少，血中A值下降，使白蛋白(A)/球蛋白(G)比值下降甚至倒置；.A越低，A/G比值缩小越明显，就说明肝脏的代偿能力越差。各种肝炎肝硬化失代偿期时，蛋白电泳中γ球蛋白明显升高；酒精性肝硬化失代偿期时，β-脂蛋白可升高。
(5)免疫球蛋白(Ig)测定:各种肝硬化脾功能亢进(或失代偿期)时，免疫球蛋白增高，但种类不同。各种肝炎肝硬化失代偿期，以免疫球蛋白G(IgG)及A(IgA)升高多见，但以IgG升高为主；酒精性肝硬化失代偿期，以IgA增高为主；原发性胆汁性肝硬化失代偿期，以免疫球蛋白M(IgM)增高为主。
(6)血清酶测定:酒精性肝硬化失代偿时，碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)均可升高，且γ-GT升高比ALT升高明显。肝炎肝硬化脾功能亢进时，ALP、γ-GT、单胺氧化酶(MAO)，可升高；胆碱酯酶(ChE)活力，如极度下降时，表示病情严重，预后不良。
(7)骨髓象检查:血液中减少的血细胞，在骨髓中呈现增生表现，但出现成熟障碍现象。
(8)腹水检查:肝硬化腹水，为漏出液；如并发腹膜炎时，腹水穿刺液中蛋白及细胞数增加，细菌培养可为阳性。
(9)血清免疫学测定:日本血吸虫病肝硬化脾功能亢进时，皮内试验、环卵试验、循环抗原抗体试验、间接红细胞凝集试验等，均可呈阳性。
(10)凝血酶原时间(PT)测定:各种肝硬化晚期，肝实质严重损害，凝血酶原时间(PT)明显延长。
(11)血氨及胆固醇测定:肝硬化肝性脑病时，血氨可升高；肝硬化失代偿期时，血胆固醇(TC)常降低。
(12)血清铜(Cu)及有关化合物测定:肝豆状核变性肝硬化脾功能亢进时，血清铜含量、血清铜蓝蛋白含量、血清铜氧化酶均降低。
(13)肾上腺素试验:肝硬化脾功能亢进时，肾上腺素试验后，外周血中三种血细胞明显升高，白细胞常为原来量的1倍以上。
(14)同位素试验:用同位素51铬(51Gr)标志的红细胞注入体内，肝硬化脾功能亢进者，脾脏中红细胞破坏明显增加。